在微生物工作中,菌種的接種移植是一項主要操作,這項操作的特點就是要保證菌種純種,防止雜菌的污染。在一般環境的空氣中,由于存在許多塵埃和雜菌,很易造成污染,對接種工作干擾很大。而無菌室的存在對于菌種的保護起到了很好的作用,減少了污染情況,所以無菌室也稱接種室,是系統接種、純化菌種等無菌操作的專用實驗室。
一、無菌實驗室裝修設計細節
根據經濟和科學的角度來講,無菌實驗室裝修的基本要求如下:
(1)門應設在離工作臺最遠的位置上,內間應當設拉門,以減少空氣的波動;外間的門最好也用拉門,要設在距內間最遠的位置上。
(2)無菌實驗室設計應有內、外兩間,內間是無菌室,外間是緩沖室。房間容積不宜過大,以便于空氣滅菌。內間面積2×2.5=5m2,外間面積1×2=2m2,
高以2.5m以下為宜,都應有天花板。
(3)無菌實驗室容積小而嚴密,使用一段時間后,室內溫度很高,故應設置通氣窗。通氣窗應設在內室進門處的頂棚上(即離工作臺最遠的位置),最好為雙層結構,外層為百葉窗,內層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內飾使用后、滅菌前開啟,以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機。
(4)在分隔內間與外間的墻壁或“隔扇”上,應開一個小窗,作接種過程中必要的內外傳遞物品的通道,以減少人員進出內間的次數,降低污染程度。小窗寬60cm、高40cm、厚30cm,內外都掛對拉的窗扇。
二、無菌實驗室實驗操作注意事項
1.實驗進行前,無菌室及無菌操作臺以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%的酒精擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后,才開始實驗操作。
2.小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
3.工作人員應注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級之無菌操作臺(至少ClassII)。操作過程中,應避免引起氣溶膠類物質的產生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。
4.接種針每次使用前后,必須通過火焰灼燒滅菌,待冷卻后,方可接種培養物。
5.無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70%的酒精擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在抬面之中央無菌區域,勿在邊緣的非無菌區域操作。
6.使用無菌瓶內的溶液是,不可將無菌敷料堵塞瓶口傾倒無菌溶液,或直接伸入溶液瓶內蘸取,以免污染剩余的溶液。
7.每次操作過程中,均應做陰性對照,以檢查無菌操作的可靠性。
8.如有菌液灑在桌上或地上,應立即用5%石碳酸溶液或3%的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘,再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時,應立即脫去,高壓蒸汽滅菌后洗滌。
9.無菌包內物品不慎污染或無菌包浸濕,外界微生物可滲入包內,造成污染,需重新消毒。
10.凡帶有活菌的物品,必須經消毒后,才能在水龍頭下沖洗,嚴禁污染下水道。
11.吸取菌液時,必須用吸耳球吸取,切勿直接用口接觸吸管。
12.帶有菌液的吸管,試管,培養皿等器皿應浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內消毒,24小時后取出沖洗。
13.戴手套時應注意未戴手套的手不可觸及手套外面,而戴手套的手則不可觸及未戴手套的手或另一手套的里面。戴手套后如發現破裂,應立即更換。脫手套時,須將手套口翻轉膠下,不可用力強拉手套邊緣或手指部分,以免損壞。
14.實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%的酒精擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后。