植物組織培養實驗室的設置:植物組織培養實驗室與其他實驗室的主要區別是要求無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。植物組織培養實驗室的面積大小和裝備取決于兩個因素:一是實驗性質和研究內容,二是能承受的經費能力。然而,一個標準的植物組織培養實驗室必須具備下列條件:
①清洗和儲存玻璃器皿、塑料器皿和其他實驗器皿;
②培養基的配制、滅菌和儲存;
③植物材料的無菌操作;
④可控溫度、光照、濕度等條件,以便對材料進行體外培養;
⑤培養物生長發育過程的顯微觀察。因此,植物組織培養實驗室至少需要有三間相連但相互隔開的房間:第一間用于玻璃器皿的清洗和儲存,以及培養基的制備(稱為培養基室);第二間用于無菌操作(稱為接種室);第三間用于放置培養物(稱為培養室)。此外,如果條件許可,應配備能進行組織和細胞生長顯微觀察的細胞學實驗室。
(一)培養基室
培養基室的清洗區應備有各種類型的毛刷、大水槽和冷熱水源。此外,還應備有塑料桶,用以浸泡需要清洗的實驗室器皿;鼓風干燥箱,用以干燥清洗后的器皿;防塵廚,用以儲存干凈的器皿。條件允許的話,清洗區應單獨設一個房間。如果培養基的制備和器皿的清洗在同一個房間內進行,應特別注意不要使清洗干擾培養基的制備,嚴格防止肥皂水等濺入培養基內。可以在清洗區與培養基制備區之間臨時加一塊擋板,或把清洗時間和配制培養基時間錯開。
配制培養基所需的一般設備包括以下幾種。
①工作臺:工作臺的高度應適合于操作人員工作,要求表面平整、耐高溫、放置水平。
②低溫冰箱:用以儲存長期保存的藥品。
③普通冰箱:用以儲存各種化學藥品、植物材料和短期儲存儲備液及母液等。
④大塑料瓶:用以儲存蒸餾水。
⑤天平:用于稱量。
⑥電熱磁力攪拌器:用以溶解化學藥品。
⑦電爐:用于加熱溶化瓊脂和手提式高壓滅菌鍋的加熱。
⑧酸度計或pH試紙。
⑨抽氣機或真空泵:用以輔助過濾滅菌。
⑩恒溫水浴:用于融化瓊脂。
?高壓滅菌鍋:用以進行培養基滅菌。
?其他用具。
(二)接種室
接種室也稱為無菌操作室,好能與外界隔離,不能穿行或不受其他干擾。接種室分更衣間、緩沖間及操作間三部分。更衣間供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩之用。緩沖間位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無菌環境,同時可放置恒溫箱及某些小型儀器。操作間則用于無菌操作,其大小要適當,且其頂部不宜過高以保證紫外線的滅菌效果,墻壁光滑無死角以便清洗和消毒。接種室為密閉式,用紫外線滅菌燈進行空氣消毒。有些實驗室使用電子消毒滅菌器,它在高壓電場作用下,電子管的內外電極發生強烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑,能與細菌的胞膜及酶蛋白進行氧化分解反應,因此靠臭氧氣體彌漫性擴散達到殺菌的目的,使消毒時沒有死角。消毒后空間內的殘留臭氧只需30~40min即能自行還原成氧氣,對空間不留異味、消毒物體表面不留殘毒。
接種室的主要儀器設備是超凈工作臺。超凈工作臺可直接購買,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好,為植物組織培養工作提供了良好的無菌操作環境。
(三)培養室
培養室的溫度必須是可控的,一般是用空調或熱風機使溫度保持在(25±12)℃。若要求更高或更低的溫度,可使用裝有熒光燈的培養箱。培養箱可安裝在培養室之外任何方便和安全的地方。
植物組織培養要求一定的光照,采用日光燈源,一般光照強度為1000~30001x。但有些實驗需要在散射光下進行,有些則要求完全黑暗條件。因此,在設備上對此應有所準備。光源可由自動定時開關控制。暗培養一般是在特制的木櫥內進行或加蓋黑布。
培養室的濕度應控制在相對濕度80%左右,當培養室的相對濕度降低到50%以下時,應采取措施增加濕度,以免培養基變干。如果濕度太高則應除濕,以免培養瓶蓋塞發潮,增加污染的機會。
在培養室內應設有若干培養架以放置培養物。培養架大小一般為1200mm×600mm×400mm,層數根據培養室的空間高度而定,每層培養架裝上玻璃板。但玻璃板下面的日光燈在工作時易使玻璃發熱,使放置其上的培養瓶及培養基的溫度增加,影響培養效果。安裝剛硬的鐵絲網或細鋼管,在其上放篩孔塑料盤,以便空氣流動和穩定溫度,同時也可使頂層的燈光能透射到下層的培養物上。培養架可以木制也可以鋼制,每層分別裝有日光燈管。燈管和上一層架子之間裝有隔熱層,以免上層培養物的底部受熱。
三角瓶、玻璃罐或培養皿都可直接置于培養架上,或先置于大小合適的盤子上。再將盤子置于培養架上。所用的容器若為試管,就需要有試管架。試管架可用鐵絲制作,每個試管架能裝25個或50個試管。培養容器必須粘上標簽或用記號筆標注,注明詳細的實驗細節(植物名稱、外植體、培養基、培養時間等)。
培養室內應設有搖床,以便進行液體懸浮培養。搖床可以是平動式的,也可以是旋轉式的。應選購溫光可控式搖床。
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